不同的引物当然退火温度也不相同，一般在设计引物的时候，程序就会显示出Tm值是多少。

在做PCR的时候，将退火温度设定的稍微低于Tm值一点，降低引物的特异性，可能会好点。

当然，做PCR有一定的运气成分，同样的条件有时能扩出基因来，有时候却不能。

一般来说，一直无法P出基因的话，首先就要检查引物设计是否有问题，如果没有问题，或者以前P出来过。

那么检查下退火温度，多试几个温度。

再就是Mg离子的浓度，模板不要太多。

多尝试一下。

总之，设定退火温度的时候略微比Tm低一点，适当的调整，多多尝试，就好了。